ATA-1372A寬帶放大器：微流控流式細胞打印技術制備功能性肝細胞微球
微流控技術是一種通過微小的通道和微型裝置對流體進行精確操控和分析的技術。它是現代醫學技術發展過程中的一種重要的生物醫學工程技術，具有廣泛的應用前景和重要性。它在高通量分析、個性化醫療、細胞篩選等方面有著巨大的潛力，Aigtek安泰電子今天就將為大家分享一篇微流控領域研究成果，一起接著往下看吧~
三維培養的多細胞肝臟微球模型有利于肝纖維化治療的發展。雖然這些模型可以再現纖維化疾病，但目前通過隨機聚集產生微球方法是不受控制的，較易產生大小、功能和效用不穩定的球體。生物3D打印可以建立自動化成型，簡化過程和增加可靠性。然而，艙室的加載仍然是隨機的，產生了不均勻的組成和功能性質的微球。這種可變性降低了使用微球進行篩選的準確性和靈敏度。
為了實現卓越的體外肝臟建模，需要建立新的方法來創建具有可控結構、成分和功能特性的微球。近日，來自美國加利福尼亞大學的AdamRAbate團隊利用微流控流式細胞打印技術（μFCP）成功制造了精密肝臟細胞微球。所產生的細胞球體具有優越的功能均勻性，與隨機生成的球體相比，具有更準確的統計窗口。相關研究以“Controlledfabricationoffunctionalliverspheroidswithmicrofluidicflowcytometricprinting”為題于2022年8月2日在線發表在Biofabrication上。
圖1微流控流式細胞打印技術產生肝細胞微球示意圖
首先，作者將肝細胞（HepG2）細胞經胰蛋白酶處理后，通過26G針三次，使細胞團塊斷裂，制成單個HepG2細胞懸液。同樣，肝星狀細胞（HSC）也經胰酶和EDTA消化為單細胞懸液。基于微流控芯片開發的單細胞打印機可通過定制的LabVIEW界面實現自動化。作者采用康寧的6孔或384孔的圓底超低粘附微孔板作為印刷或被動加載基板。利用懸浮細胞制備細胞微球的一個挑戰是，不是所有的細胞都是活的。因此，使用隨機分隔技術，死亡的細胞包含在種子中，引入可以改變球形性質的可變性。用活性染料可以丟棄死細胞，這是一種獨特而有價值的特性（圖2）。
圖2與隨機沉淀法相比，產生的細胞存活率和均勻度更高
球形大小由培養時間和種子中起始細胞的數量決定。為了說明μFCP在控制球體大小方面的效用，作者打印出具有不同細胞數量的種子，并監測它們的生長，與隨機加載相比，最終的大小變異性要小約3倍。為了說明準確控制其成分的能力，我們使用兩種方法構建了含有10個HepG2和10個造血干細胞的目標成分的球體。對于μFCP，HepG2細胞平均10.4個，HSC細胞平均10.1個，標準誤差分別為0.9和0.8。對于隨機加載，根據泊松分布，我們觀察到HepG2細胞平均數量為9.4，HSC細胞平均數量為9.9，標準誤差分別為3.4和3.6。因此，印刷的球體比隨機加載產生的球體尺寸變異性低三倍。
圖3采用微流控單細胞打印技術制備多細胞肝球，得到更加均勻的多細胞肝臟微球
纖維形成依賴于肝細胞與造血干細胞的相互作用。因此，這些細胞的比例變化可導致不規則的球形功能。為了研究細胞比例對肝球形表型和纖維化模型的影響，作者打印了不同比例的HepG2和HSC，每個球形有100個細胞。培養6天后，觀察到球體大小隨著HSC數量的增加而減小。隨著HSC數的進一步增加，緊致度漸近，球體的形狀變得不規則。造血干細胞增加超過60%會導致非生理狀態和次優球體。為了更深入地研究這一問題，作者量化了球形膠原蛋白的生成，這是纖維化中的關鍵功能性生物標志物。在50%以下，總膠原蛋白隨星狀細胞數量線性增加，每個星狀細胞產生的膠原蛋白數量大致不變（圖4）。
圖4肝細胞微球細胞型比例的系統研究
使用細胞微球進行藥物篩選時，其大小和功能的均勻性直接影響準確性。由于μFCP可以制備均勻性的微球體，與隨機技術相比，它可以提供更精確的篩選。為了評估藥物反應的可變性，我們使用TGF-β1促纖維化化合物處理微球，這是一種有效的星狀細胞激活刺激方式，導致I型膠原的產生。為了比較功能均勻性，我們通過計算I型膠原的面積來量化I型膠原的數量。實驗表明，TGF-β1顯著增加了打印的球狀體和隨機生成的球狀體中的I型膠原，與隨機生成的相對標準誤差測量相比，打印出來的球體導致測量變異性降低，測量可變性大大增加了藥物影響的統計顯著性（圖5）。
圖5單細胞打印肝細胞微球利于準確的體外藥效評價
基于隨機聚集所產生的肝細胞微球具有可變的尺寸和功能的缺點，限制了它們再現肝臟生物學和纖維化的可重復性，以及使用它們作為組織模型進行藥物篩選的準確性。本文所提出的微流控單細胞打印方法克服了這些問題，肝細胞微球是由所需精確數量的細胞類型和高活力的細胞組成。將多路復用技術與單細胞精度相結合，可以精確地制作出設計復雜度更高的細胞微球，這將有助于研究如何控制細胞微球的性質或引入新的功能特性。
帶寬：（-3dB）DC~3MHz
電壓：70Vp-p（±35Vp）
電流：2Ap
功率：70Wp
可程控
西安安泰電子是專業從事功率放大器、高壓放大器、功率信號源、前置微小信號放大器、高精度電壓源、高精度電流源等電子測量儀器研發、生產和銷售的高科技企業，為用戶提供具有競爭力的測試方案。Aigtek已經成為在業界擁有廣泛產品線，且具有相當規模的儀器設備供應商，樣機都支持免費試用。如想了解更多功率放大器等產品，請持續關注安泰電子官網m.fjiakun.cn或撥打029-88865020。
原文鏈接：http://m.fjiakun.cn/news/2539.html