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　　微流控技術是一種通過微小的通道和微型裝置對流體進行精確操控和分析的技術。它是現代醫學技術發展過程中的一種重要的生物醫學工程技術，具有廣泛的應用前景和重要性。它在高通量分析、個性化醫療、細胞篩選等方面有著巨大的潛力，Aigtek安泰電子今天就將為大家分享一篇微流控領域研究成果，一起接著往下看吧~

　　臨床上，對于外傷性、退行性疾病或腫瘤切除后導致的大體積骨缺損的生理性修復一直是重大的挑戰，這不僅要求植入材料能夠充分填充大體積骨缺損區域，而且更重要的是需要恢復受損部位正常的生理功能。最新研究成果表明，基于組織工程原理構建的、具有生物活性的組織工程骨對于骨缺損的生理功能重建具備獨特的優勢，臨床治療效果甚至優于自體骨組織。雖然，脫鈣骨基質（DBM）因其固有的骨仿生結構、礦化成分、生物相容性和成骨活性，被認為是臨床上理想的骨再生材料，但是仍然面臨細胞負載率低和成骨誘導活性成分損失等問題，嚴重制約了組織工程骨的臨床轉化。

近期，上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院、上海市組織工程重點實驗室、組織工程國家工程研究中心周廣東團隊，提出了一種骨再生單元復合脫鈣骨框架材料構建組織工程骨及大體積骨缺損修復的新策略。研究者首先通過微流控技術制備具有成骨微環境仿生的光交聯甲基丙烯酸酯明膠/透明質酸（GelMA/HAMA）微凝膠（如圖1），然后接種骨髓間充質干細胞（BMSCs）并進行成骨誘導培養構建骨再生單元（BRUs）：1）BRUs可以直接注射至裸鼠皮下實現異位成骨（即“可注射骨”）；2）BRUs也可以復合DBM框架材料構建具有三維形態的組織工程骨，并成功修復了兔子脛骨缺損。相關研究論文：“Large-sized bone defect repair by combining a decalcified bone matrix framework and bone regeneration units based on photo-crosslinkable osteogenic microgels”發表于雜志Bioactive Materials（IF=14.593）上。

　　圖1骨再生單元復合脫鈣骨框架材料修復脛骨缺損策略的示意圖

　　1.成骨微環境仿生光交聯微凝膠的理化性能表征

　　研究者利用微流控技術對負載成骨活性成分DBM微粒和血管化生長因子VEGF的凝膠液體進行光聚合制備GelMA/HAMA水凝膠微球（VDGH），成功構建了具有成骨微環境仿生功能的微凝膠。實驗結果表明，VDGH微凝膠的理化性質能夠通過微流控和光交聯技術的結合可控調節，例如微球尺寸、均一度、力學強度、活性因子釋放和生物降解性等（如圖2）。

　　圖片圖2成骨微環境仿生光交聯微凝膠的理化性能表征

　　2.骨再生單元構建及生物學評價

　　研究者首先優化了骨再生單元構建的接種條件，并確認了60mil/mL的BMSCs接種于300μm微凝膠能夠獲得最佳的細胞接種效率和增殖效果。然后，實驗通過活/死細胞染色和鬼筆環肽染色表征了BMSCs接種于VDGH微凝膠培養1，4，7和14天后的細胞鋪展、增殖、和細胞外基質分泌情況（如圖3）。接著，經過成骨誘導培養14天后，接種干細胞的VDGH微凝膠逐漸形成了成骨基因和蛋白表達相對成熟的骨再生單元（如圖4）。

　　圖3骨再生單元的生物學評價

　　圖4體外成骨誘導分化評價

　　3.可注射骨構建及生物學評價

　　研究者將上述方式構建的BRUs注射至裸鼠皮下，并系統地進行了DNA含量、力學性能、濕重、體積、Micro-CT和組織學評價。實驗結果證實，體內植入8周后BRUs能夠再生成熟的骨組織，包括大量的骨特異性ECM沉積、清晰的骨小梁結構和豐富的血管長入（如圖5）。BRUs穩定的骨再生潛力可能歸因于以下優勢：1）微凝膠表面粘附的BMSCs具有足夠的機會接觸成骨誘導信號，以便于實現細胞-細胞和細胞-ECM的相互作用，大大加快了BMSCs的成骨誘導分化；2）相比于整塊水凝膠而言，微凝膠之間的大孔結構保證了營養物質的充分滲透和運輸；3）微凝膠的間隙以及促血管生成的仿生微環境（VEGF緩釋）有利于血管長入，從而促進再生骨組織的血管化。因此，具有良好可注射性和骨再生潛力的BRUs，將為骨缺損的微創治療提供潛在的應用前景。

　　圖5體內可注射骨構建及生物學評價

　　4.三維形態的組織工程骨構建及脛骨缺損修復評價

　　研究者將BRUs復合DBM框架材料植入裸鼠皮下，并成功再生了具有三維形態的組織工程骨（如圖6）。這一策略不僅克服了可注射BRUs在三維形態控制和力學維持上的缺陷，也有效解決了DBM支架材料在細胞接種率低和成骨仿生微環境缺失等方面的問題。最后，具有三維形態的組織工程骨成功修復了兔子15mm長的脛骨缺損（如圖7）。實驗結果表明，理想的骨修復效果歸功于充足的細胞接種量，BRUs提供的成骨和血管化仿生微環境，以及激活內源性BMSC歸巢。總之，當前的研究創新性地開發了一種理想的骨仿生微載體，這將為骨再生和大體積骨缺損修復提供一種嶄新的策略。

　　圖6三維形態的組織工程骨構建及生物學評價

　　圖7三維形態的組織工程骨應用于兔子脛骨缺損修復

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